细胞冻存液是用于细胞冷冻保存的液体，它能够保护细胞在低温下不受损伤，尤其是在细胞冻结和解冻过程中。冻存液通常包含保护剂、缓冲液以及其他有助于维持细胞存活的成分。以下是常用的细胞冻存液配方及其成分：
1.常见配方
配方1：基础冻存液
DMSO（二甲基亚硫酰胺）：10%
FBS（胎牛血清）：90%
这种配方是简单的冻存液，DMSO作为常用的细胞保护剂，可以有效防止细胞在冻结时形成冰晶，FBS提供了额外的保护和营养成分。
配方2：改进冻存液（适用于敏感细胞）
DMSO：5-10%
FBS：50-80%
PBS（磷酸盐缓冲液）：10-20%
这种配方的冻存液减少了DMSO的浓度，适合对于DMSO较敏感的细胞，FBS的比例保持较高。
配方3：高浓度DMSO冻存液
DMSO：20%
FBS：70%
PBS：10%
这种配方适合对DMSO耐受性较好的细胞，能够提供更强的保护。
2.冻存液的组成和作用
二甲基亚硫酰胺（DMSO）：作为细胞冻存液的主要保护剂，DMSO可以防止细胞内水分在低温下结冰，减少冰晶对细胞结构的破坏。它的浓度通常在5%-20%之间。
胎牛血清（FBS）：FBS中含有蛋白质、脂肪、维生素、矿物质等，能够为细胞提供营养，增强冻存过程中的细胞生存率。
PBS：用于维持冻存液的pH值和渗透压，确保细胞能够在低温环境下存活而不受损。
3.冻存步骤
制备冻存液：根据所用细胞的特点选择合适的冻存液配方。
离心与重悬：将细胞进行离心，然后将其重悬在冻存液中，确保细胞浓度适宜（通常为1-10×10^6个细胞/mL）。
分装：将细胞冻存液分装到冻存管中，确保每个冻存管中细胞量适当。
缓慢冷冻：使用程序降温设备将细胞缓慢降温至-80°C，一般每分钟降温1°C至-80°C，再转移至液氮保存。
存储：将冻存管放入液氮中进行长期保存。
4.注意事项
DMSO浓度：DMSO浓度过高可能对细胞造成毒害，因此应根据细胞类型选择合适的浓度。
缓慢冷冻：缓慢的冷冻过程能够使水分缓慢结晶，减少对细胞的伤害。程序降温仪器通常有内建的逐步降温程序。
解冻过程：解冻时要迅速进行，避免细胞长时间暴露在高浓度的DMSO中，从而降低其存活率。
通过适当的冻存液配方和冷冻过程，可以显著提高细胞在冻存过程中的存活率，并确保它们在解冻后能够恢复正常功能。
